一、細(xì)菌培養(yǎng)
在臨床實(shí)踐中,對社區(qū)獲得性肺炎患者通過應(yīng)用常規(guī)的檢測方法來確定病原菌仍存在許多障礙。從血液或胸腔積液培養(yǎng)分離獲得SP仍然作為診斷的金標(biāo)準(zhǔn),但它的陽性率僅10%~30%,甚至更低。SP可定植于健康人群的鼻咽部及不充足或不恰當(dāng)?shù)奶禈?biāo)本使得基于痰培養(yǎng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)飽受爭議。
此外,近1/3的患者進(jìn)行病原學(xué)檢測前已接受了抗生素治療,這又降低了這種傳統(tǒng)的檢測手段的敏感性。若通過一些創(chuàng)傷性操作所獲得的標(biāo)本(如支氣管灌洗液、肺穿刺獲得的肺組織等)培養(yǎng)分離得到SP,則對病原學(xué)的診斷具有決定性意義。
但是,由于創(chuàng)傷性技術(shù)需要專業(yè)人員進(jìn)行操作并且有發(fā)生并發(fā)癥的可能,因此不作為常規(guī)檢查。雖然細(xì)菌培養(yǎng)所需要等待的時(shí)間較長(一般3~5 d),可能出現(xiàn)假陰性的結(jié)果(后者與標(biāo)本量過少、已接受抗生素治療或不理想的實(shí)驗(yàn)室條件均有關(guān)),但由于它是進(jìn)行藥敏試驗(yàn)及對流行株進(jìn)行流行病學(xué)分析的基礎(chǔ),因此該技術(shù)在臨床上仍有不可取代的地位。
二、免疫層析法
免疫層析法(ICT)是目前廣泛用于SP診斷的快速方法。其檢測的抗原為Cpolysaccharide抗原,是位于細(xì)菌細(xì)胞壁的C多糖,為SP各血清型所共有。由于ICT以尿樣為檢測對象,故又稱為尿抗原檢測法。
目前世界各國采用的是美國緬因州波特蘭Binax公司生產(chǎn)的Binax NOW ICT試劑盒。這是個(gè)非常簡便的方法,只需15 min便可完成。該方法推薦使用的標(biāo)本為標(biāo)準(zhǔn)的非濃縮尿樣。將拭子條浸入尿樣后置于檢測卡中,再加入6滴試劑,15 min后出現(xiàn)1條色帶的為陰性,2條色帶的為陽性結(jié)果。該試劑盒在臨床診斷中具有較好的敏感性和特異性。
據(jù)現(xiàn)有的報(bào)道敏感性為67%~92%(大多為75%~85%),特異性為90%~100%。該試劑盒同樣可用于檢測胸腔積液、腦脊液和支氣管灌洗液。2002~2006年,西班牙的Jose M. Porcel等人采用該試劑盒對患者的胸水進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)敏感性為70.6%,特異性為93.3%。該方法較突出的優(yōu)點(diǎn)是抗生素的使用并不影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,因此它不能用于評價(jià)抗生素治療效果。在感染后1月內(nèi)該試驗(yàn)均可陽性,這也造成了那些反復(fù)感染的病例被誤診的潛在可能性。特別在兒童中,由于SP的定植造成該試驗(yàn)非特異性陽性的問題已逐漸引起了關(guān)注。盡管該試驗(yàn)在SP感染的兒童中敏感性較高,但在尿抗原檢測呈陽性的病例中仍有7%~15%的病例沒有SP感染的臨床證據(jù)。
ICT雖然在SP鼻咽攜帶者中存在假陽性結(jié)果,但由于ICT標(biāo)本采集簡便,不具創(chuàng)傷性,不受先前抗生素治療干擾,具有較高的敏感性和特異性,15 min便可完成檢測等優(yōu)點(diǎn),是快速診斷SP感染的簡便方法。
三、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)敏感性高,特異性強(qiáng),實(shí)時(shí)熒光定量PCR可對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行可重復(fù)定量檢測,在擴(kuò)增的每個(gè)循環(huán)中至少收集一次熒光數(shù)據(jù),對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控,從而增加PCR的敏感性和特異性。2001~2004年,Alban Le Monnier等對社區(qū)獲得性肺炎患者的胸腔積液進(jìn)行SP16S rDNA基因檢測,發(fā)現(xiàn)該試驗(yàn)的敏感性為77%。在抗生素治療初期,PCR不受其干擾,因此為早期診斷提供了較可靠的依據(jù)。然而,與ICT相比,PCR是一種復(fù)雜、耗時(shí)的檢測方法,還未完全標(biāo)準(zhǔn)化,從而妨礙其成為SP臨床診斷方法,主要作為實(shí)驗(yàn)研究的技術(shù)方法。