大鼠肺泡巨噬細胞(NR8383)介紹：大鼠肺泡巨噬細胞(NR8383) (正常大鼠，1983 年)來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細胞。細胞在gerbil 肺細胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9 個月。隨后，不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法從單個細胞克隆并亞克隆NR8383 細胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細胞表現(xiàn)出巨噬細胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，Fc 受體，氧化降解；分泌IL-1, TGF-β和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長因子。NR8383細胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TGF-β前體。在博萊霉素刺激下，TGF –β mRNA 表達也上升。細胞對內(nèi)毒素敏感。1-10 鈉克/毫升的LPS 水平抑制增生達50%。即使達到0.001 毫克/毫升的水平，LPS 抑制還是無毒且在后續(xù)過程中可逆的。大鼠肺泡巨噬細胞(NR8383)提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細胞的均一來源，可以用于體外研究巨響細胞相關(guān)活性。

大鼠肺泡巨噬細胞(NR8383)特性：

1） 來源：肺；巨噬細胞

2） 形態(tài)：巨噬細胞，半懸浮生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

大鼠肺泡巨噬細胞(NR8383)接受后的處理：

1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25 瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3）棄去T25 瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml 明舟生物（mingzhoubio）附帶的完全培養(yǎng)基。

4）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml 明舟生物（mingzhoubio）附帶的完全培養(yǎng)基。

5）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

大鼠肺泡巨噬細胞(NR8383)用途：僅供科研使用。

明舟生物（mingzhoubio）的大鼠肺泡巨噬細胞(NR8383)培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備F-12K 培養(yǎng)基（F-12K，GIBCO,貨號21127-022），90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL 培養(yǎng)基的15ml 離心管中混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，加入1mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。（該細胞建議使用第一種方法，將所有細胞收集起來）

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2 到1：3 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM，常溫條件下離心5 分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，吹打均勻后，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO 搖勻后進行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。