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小鼠肺癌細(xì)胞系3ll

 一、

細(xì)胞培養(yǎng)條件

細(xì)胞英文名稱:3LL 細(xì)胞

中文名稱:小鼠肺癌細(xì)胞系

生長特性:貼壁

培養(yǎng)體系:DMEM+10%FBS

傳代方法:建議第一次 1:2 傳代

傳代情況:2 天換液

凍存條件:細(xì)胞庫無血清凍存液

備注

收集瓶中培養(yǎng)基,留作過渡培養(yǎng)

二、細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到

細(xì)胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴(yán)

格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置 2-4 小時。鏡下觀察:未超過 80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養(yǎng)

液收集至離心管中,加入 6ml 完全培養(yǎng)基,放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng);超過 80%匯合度時,

根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,處理

完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基,另外

一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基)

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入 5mL 培養(yǎng)基

混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。然

后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6cm 皿中),培養(yǎng)過夜。第二

天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1-2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培養(yǎng)箱中消化

1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,

輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,完全脫落后吸出,在 1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加

1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按 5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 5-6 ml 培養(yǎng)液

的新皿中或者瓶中。PS若客戶收到 2ml 小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用 75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或

安全柜內(nèi),嚴(yán)格無菌操作;將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培養(yǎng)皿,加入 5ml 左右完

全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度:若密度未超過 80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),

視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)。

售后服務(wù)告知書

一、收到細(xì)胞處理方法

1. 收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)

定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收

細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下

細(xì)胞狀態(tài),100×,200×各一張),觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方

進(jìn)行售后的依據(jù)。

2. 收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費重發(fā)一次細(xì)胞。

3. 由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩氐挠绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞

后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后是需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和

發(fā)現(xiàn)問題后與客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于 7 天。

4. 如客戶對細(xì)胞的種類、純度、活性等特性有疑問,需提供相應(yīng)的生物學(xué)實驗檢測結(jié)果作

為依據(jù)

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